PCR實驗室的基礎知識(shí)
PCR實驗室又(yòu)叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶(méi)鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用於放大特(tè)定的DNA片段,可看作生物(wù)體外的(de)特殊DNA複製。通過DNA基因追蹤係統,能迅(xùn)速掌握患(huàn)者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別。PCR實驗室的建立方法如下:
1、建立(lì)樣品準備區:專門用作樣品的準備,在製備和(hé)操作用於核酸提取的試劑(jì)時應該采取預防(fáng)措施:⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆(lóng)不能在這個房間(jiān)操作。⑵組織培養物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。⑶用於樣品處理的(de)工具不能(néng)被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應該用有(yǒu)專(zhuān)門的防護或正(zhèng)壓活塞式移(yí)液管操作,以(yǐ)防止在吸取樣品時有氣溶(róng)膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單(dān)獨包裝的無菌一次(cì)性移液管吸取。⑹管子打(dǎ)開(kāi)前都要簡短離心以減少(shǎo)氣(qì)溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這樣會產生氣溶膠。⑺任何時候都應該穿實驗服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽(chōu)提過程中每一步之間(jiān)都要更換。實驗服要專門用於樣品準備(bèi)間,經常清洗。
2、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品(pǐn)操作,這樣增加了樣品之間汙染的機會。為了避免這一問(wèn)題,反轉錄一(yī)步可以在樣品準備區(qū)進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止汙染的方法也有報道。
3、建立前PCR區:專門用於準備各種反應,這個區域(yù)必須保持幹淨,而且沒有來自克隆和樣(yàng)品(pǐn)準備的汙(wū)染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準備,特別是專門用(yòng)於前PCR區的正壓活塞式移液管