PCR實驗室建設（shè）方案、規劃設計
PCR實驗室又叫基（jī）因擴增實驗室。PCR是聚合（hé）酶鏈式反應（yīng）(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是（shì）一種分子生（shēng）物學技術，用於放大特（tè）定的DNA片段，可看作生（shēng）物體外的特殊DNA複製。通過DNA基因追蹤係統，能迅速掌握（wò）患者體（tǐ）內的病毒含量，其精確度高達納米級別，精確（què）檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否複製、是否傳染（rǎn）、傳染性有多強、是否必（bì）要服藥、肝功能有否異常改變能（néng）及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判（pàn）斷藥物療效（xiào）如何、給臨床治療提（tí）供了可靠的檢驗依據。
開展PCR實驗室應具備（bèi）的條件
1、必須擁有標（biāo）準的的PCR熒（yíng）光實驗室;
實時熒光定量PCR技（jì）術於1996年由美國AppliedBiosesystems公司推出 由於該技術不（bú）僅實現了（le）PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它有特異性更強、有效解決PCR汙染問（wèn）題、自動化程度高等特點，目前已得到廣泛應用。
2、檢測設（shè）備（bèi）必須符合（hé）標準PCR熒光實驗室設置要求;
熒光（guāng）定量PCR儀+實時熒光定量試劑（jì）+通用電腦+自動分析軟件，構（gòu）成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測係統（tǒng）。
3、必須通過國家（jiā）臨床檢驗中心的驗收和認（rèn）證;
4、檢測人員必須通過（guò）國家臨檢中（zhōng）心業務培訓並取得合格（gé）證書;
PCR實驗室內工作人（rén）員（yuán）必須參加由（yóu）國家衛生部（bù）或各省臨床檢（jiǎn）驗中心舉辦的臨（lín）床基因擴增培訓班（bān），並持證上崗。PCR實驗室通過驗收，實驗室至少必須應有兩個（gè）以上持有“臨床基因檢測（cè）上崗證”。PCR實驗室必（bì）須建（jiàn）立嚴（yán）格的實驗室管理製度、建立標準化操作程序(SOP)、建立係列質量管理文件等，確保實驗室日常運行符合國家衛（wèi）生部的要求，確（què）保檢（jiǎn）測結果準確、確保實驗室衛生（shēng）安全，確保實驗室長期穩（wěn）定運行
5、必須（xū）在無菌無塵環境下進行操作
下麵介紹如（rú）何建立（lì）PCR實驗室
1、建立樣品準備區（qū）
這個（gè）區域專門用作樣品的準備（bèi），在製備和操作用於核酸提取（qǔ）的試劑時（shí）應該采取預防措（cuò）施：
⑴PCR產（chǎn）物和帶有要（yào）擴增序列的DNA克隆（lóng）不能在這個房間操作。
⑵組織培養物、組織標本（běn）和（hé）血清樣品都帶進樣品準備間處理，以根據應用的需要提取DNA或RNA。
⑶用於樣品處理的工具不能被用作（zuò）普通分（fèn）子克隆（lóng）的工具，也不能用作操作靶序列。
⑷DNA樣（yàng）品應該用（yòng）有專門的（de）防護或正壓活塞式（shì）移液管操作，以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺（yí）留。
⑸大（dà）體積樣（yàng）品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。
⑹管子打開前都要（yào）簡短離心以（yǐ）減少氣溶膠的產生，而且管子不能用（yòng）力崩開，這樣會產生氣溶膠。
⑺任何時候都應該穿實驗服（fú）和帶手套，手套要經常更換，尤其在抽提過程中每一步之（zhī）間都要更換。實驗服要專門用於（yú）樣品準備間，經常清洗（xǐ）。
2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需（xū）要額外的樣（yàng）品（pǐn）操作，這樣增加了樣品之間汙染的機會。為了（le）避免這一（yī）問題，反轉錄一步可以在樣品準（zhǔn）備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止汙染的方法也有報道。
3、建立前PCR區。
該去專（zhuān）門用於（yú）準備各種反應，這個區域必（bì）須保持幹淨，而（ér）且沒有來自克隆和樣品準備的汙染（rǎn）。前PCR區必須要有試劑和準備，特（tè）別（bié）是專門用於前PCR區的正壓活塞式移液管。
4、PCR實（shí）驗室試劑的操作。
⑴所用的所有溶液都（dōu）應該沒（méi）有核酸（suān）和(或)核酸酶(DNase和RNase)汙染。
⑵所有PCR試劑中使用的（de）水都應（yīng）該是高（gāo）質量的-新鮮（xiān）蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，並且是高壓滅菌。
⑶在20℃到25℃貯存的試劑（jì）建議加點（diǎn）像疊（dié）氮鈉一類的（de）抗（kàng）微生物劑，在擴增試（shì）劑或樣品製（zhì）備試劑（jì）中加入0.025%的疊氮鈉不抑製擴增反應。
⑷所用試劑都應該以大體積配製，實驗一下看試（shì）劑是否滿意，然後分裝成僅（jǐn）夠（gòu）一次使用的量進行貯存。
⑸所有試劑和樣品準備過程（chéng）中都要使用（yòng）一（yī）次性滅菌的瓶子和管子。
⑹新（xīn）配（pèi）製的試劑在用於準備新的標本之前應該加以檢驗（yàn）。
⑺樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。
5、在前PCR區建立PCR混（hún）合物。
⑴可以把（bǎ）即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝並保存（cún）在-20℃或4℃，在實驗室隻涉及到擴增一種或少數幾種（zhǒng）特異序列時這樣做很有用。
⑵如果你的實驗室（shì）使用多套引物（wù），以致於配製包括所有試劑的單一反（fǎn）應混合物不夠經濟，可以考慮分裝保存（cún）夠一（yī）天的PCR成分。
⑶作為一（yī）個規則，應該保存一套陰（yīn）性（xìng）、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配製和PCR前過程的效率和潔淨程度。而（ér）且，你（nǐ）也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品（pǐn）緩衝液以證明裏麵不含擴增抑（yì）製物。
⑷陰性樣品要與每組樣品同時做，以分析是否存在（zài）樣品與樣品（pǐn）之（zhī）間的汙染（rǎn）以及是（shì）否存在PCR產物的汙染，陰性對照（zhào）應該（gāi）包括核（hé）酸以外的所有試劑。
⑸當做陽性對照時，有（yǒu）兩個理由決定了應該（gāi）使用最少數量的（de）核酸。
⑹由於必須有對照反應（yīng），對照模板（bǎn）的特點應該予以考慮（lǜ）。
6、控製汙染的方法。
已設計出很有力的酶學方法用來消除一（yī）種形式的汙染—使用UNG，這一技術能有效地消除由（yóu）PCR產物引（yǐn）起的汙染。另一種控製汙染的方法是使（shǐ）用紫外線，這種（zhǒng）方法不能完全消除汙染問題，但可以將汙染降低幾（jǐ）個數量級。
7、後PCR區PCR完成以後，需要分析樣品並解釋數據，應該留出一個專門用於反應後（hòu）處理樣品的（de）地方。後PCR活動中（zhōng）使用的所用試劑（jì）、一次性耗材和儀器都必須是專門用於這一目的，決不能把實驗室這（zhè）一（yī）區域的試（shì）劑或儀器用於任何前PCR活動。